1)提取、纯化、捕获
(1)样本种类:
A:人源:血浆、血清、尿液、胸水;
B:鼠源、兔源:血浆、血清;
C:细胞来源:细胞培养上清、细胞;

(2)方法:
①超速离心法:本公司配备Thermo Scientific™ Sorvall™ MX Plus 系列落地式微量超高速离心机,高效分离EVs和外泌体。
②免疫分离法:特制生物芯片包被EV普适性抗体(如CD9、CD63、CD81等)或肿瘤特异性抗体(如PDL-1等),精准分离、纯化、捕获EVs和外泌体。
③PEG沉淀提取富集法:采用Thermo Scientific等公司的PEG沉淀试剂盒,结合本公司特有的纳米生物芯片富集技术,高通量、高速提取EVs和外泌体。
④脂质体纳米颗粒捕获法:采用本公司生产的阳离子脂质体纳米颗粒,高效原位捕获带负电的EVs和外泌体。
⑤浓缩超滤法:采用Merk等公司的浓缩柱,结合本公司特有的纳米生物芯片富集技术,高效分离、纯化EVs和外泌体。
2)表征
本公司主要采用电镜、DLS (动态光散射)和NTA (纳米粒子示踪分析)方法对EVs和外泌体形态、粒径、电位、数量等进行表征。
电镜图 粒径电位图(血浆标本)
电镜图 粒径电位图(细胞上清标本)

Zhou J, Wu Z, Hu J, Yang D, Chen X, Wang Q, Liu J, Dou M, Peng W, Wu Y, Wang W, Xie C, Wang M, Song Y, Zeng H, Bai C. Sci Adv. 2020 Nov 20;6(47):eabc1204.

3)生物标志物检测
(1)RNA:包括miRNA、mRNA、circRNA、lncRNA等RNA靶标,包括探针的设计、合成、包被、性能验证、检测、数据分析等。
(2)膜蛋白:包括EVs和外泌体膜上各种蛋白靶标,含各类直标/非直标荧光抗体的筛选、包被、性能验证、检测、数据分析等。

RNA检测

Zhou J, Kwak KJ, Wu Z, Yang D, Li J, Chang M, Song Y, Zeng H, Lee LJ, Hu J, Bai C. Cell Physiol Biochem. 2018;47(5):1909-1924.

 

CD63和PD-L1两种膜蛋白的EV亚群鉴定
Double immunofluorescence staining of CD63 and PD-L1 membrane protein.

Zhou J, Wu Z, Hu J, Yang D, Chen X, Wang Q, Liu J, Dou M, Peng W, Wu Y, Wang W, Xie C, Wang M, Song Y, Zeng H, Bai C. Sci Adv. 2020 Nov 20;6(47):eabc1204.

1. 细胞转染(图A和图B) 2. Confocal高清成像(图A)3. TIRF高清成像(图B)
A Confocal
B TIRF
前列腺癌细胞株LNCaP免疫荧光染色

Double immunofluorescence staining for target protein of LNCaP cells

A Confocal
B TIRF
肺癌细胞株A549膜蛋白双免疫荧光染色

Double immunofluorescence staining for membrane protein of A549 cells

Zhou J, Wu Z, Hu J, Yang D, Chen X, Wang Q, Liu J, Dou M, Peng W, Wu Y, Wang W, Xie C, Wang M, Song Y, Zeng H, Bai C. Sci Adv. 2020 Nov 20;6(47):eabc1204.

本公司配备NIKON全内反射荧光显微镜(Total Internal Reflection Fluorescence Microscope,简称TIRF),高清成像,并拥有多项AI数据分析软件著作权专利。
可根据客户需求设计并合成特异性靶向目的基因的分子信标(含miRNA、mRNA、circRNA、lncRNA)

可根据客户需求包被需求设计并合成各类脂质体纳米颗粒,用于转染细胞、DNA、RNA,包被DNA、RNA、疫苗、抗体及药物递送等